Diabetologia：诱导但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次浮现口内自身HIV到浮现1HG肝炎诊疗病症的令人满意不下在学龄前时代就有很好的描绘，多个口内自身HIV阴性的学龄前中会有70%在肝脏转换后10年内患上肝炎，而随访15年的学龄前这一分之一降低到84%。比起，占多数诊疗1HG肝炎一半以上的HG1HG肝炎的肺癌选择性还没有人给予充分的数据分析。

愈发多的人开始用作分期系统来定义1HG肝炎的令人满意：个体在浮现多种口内自身HIV时进入第1阶段性，浮现高血压异常时进入第2阶段性，浮现病症时进入第3阶段性。一些多发口内自身HIV阴性的个体，在1期和2期，令人满意较更慢，并发展为肺癌的1HG肝炎。我们在此之前描绘了一第三组在首次安全检查到多种口内自身HIV样品后最更少10年无肝炎的极更慢令人满意者，这第三组病患者人数更少，但构造非常明确。随后，我们发现口内自身上皮细胞膜特异性CD8+T细胞膜化学反应在令人满意加速的病患者中会基本不普遍存在，但在近期肺癌和仍然普遍存在的肝炎病患者中会很更易安全检查到。这或许表明，与令人满意病患者远比，这些病患者神经性化学反应的抑制增强。

一时期数据得出结论，尽管抑制性T细胞膜(Treg)数量正常，但肝炎病患者普遍存在一些功能性缺陷，其中会以外对IL-2的化学反应灵活性下降。此外，肝炎病患者中会的效应CD4+T细胞膜或许对抑制来得具抵抗性，展现为效应T细胞膜的依赖性减弱，自然产生的Treg和体外产生的作用于Treg，以及上皮细胞膜经历的CD4+T细胞膜中会IL-2化学反应减弱。本数据分析的目的是描绘了CD4+抑制性T细胞膜(Treg)在群集极加速令人满意者中会的构造，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间段为18-32年。

步骤：BOX数据分析是一项以年轻人为基础的纵向数据分析，在21岁以下确诊的病患者亲戚中会安全检查1HG肝炎的险恶因素。我们在此之前描绘了仍然加速令人满意者的构造，他们持续保持多重口内自身HIV阴性最更少10年，但没有人浮现肝炎的诊疗病症，更慢性或非开展性神经性。随后，10名暂时持续保持无肝炎并情愿提供大量血清样品的加速令人满意者纳入T和B细胞膜功能性分析。在目前的数据分析中会，8名更慢令人满意者(SP第三组)，中会位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁错综复杂的口内自身HIV阴性。所有的旁观者都属于1HG肝炎令人满意的1期，尽管一些人随后丧失了口内自身HIV对某些上皮细胞膜的阴性化学反应，然而，一名病患者已经属于2期最更少6年，但没有人浮现诊疗病症，一名病患者被确诊为肝炎，该病人72岁，在采集实验样品时，其HbA1c下降时到53 mmol/mol(7%)，在数据分析中会对该酪氨酸开展了单独审计。除去外周血单个核细胞膜(PBMCs)，采用多模板流式细胞膜奥义和T细胞膜依赖性试验审计酪氨酸中会Treg的基频、特异性和功能性。用作FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、总括和回归)开展无监督聚类分析，审计Treg特异性。

结果：与有益酪氨酸远比，来自更慢令人满意体的潜意识CD4+T细胞膜的监督聚类看出，抑制的潜意识CD4+ Treg基频降低，与糖皮质激素作用于的TNFR特别蛋白(GITR)隐含降低有关。一名HbA1c下降时的病患者与令人满意加速者和最简单的对照第三组远比，Treg谱有所各有不同。功能性得出结论，与有益酪氨酸远比，来自加速令人满意体的Treg作用于的CD4+效应T细胞膜依赖性引人注意受损。展现为对效应CD4+T细胞膜CD25和CD134隐含的依赖性降低。

布1 透彻的特异性分析看出，CD4+Treg亚HG在更慢令人满意队列中会降低。由FlowSOM分解的Treg二楼，聚集在来自所有酪氨酸的活CD4+CD45RA -细胞膜上。根据上面物隐含鉴定造出10个元簇:潜意识T细胞膜_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;潜意识T cell_4;CD49b潜意识T细胞膜;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞膜;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)用作9个各有不同Treg上面分解的10个元簇的MST。每个端口推选一个战斗群(100个战斗群)，来得大的元战斗群(10个元战斗群)在端口第三组区域内上色。每个端口中会的糕布指出单个上面的隐含级别。(b)每个元聚类的热布，以看出全面性上面隐含。(c, d)为HD第三组(c)和SP第三组(d)分解布，以及FlowSOM辨别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相比较稀土元素为每个metacluster罐本站布(稀土元素> 0.05%)确定为HD和SP第三组:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +潜意识T细胞膜(h)、潜意识T cell_1(i),潜意识T cell_2 (j),潜意识T cell_3 (k) n d CD49b潜意识T细胞膜(l)。紫色白点推选**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon一组符号秩检测。此键适用于布形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

布2 用作CITRUS的预测模HG声称，Treg基频的降低是令人满意加速的徽章。分级暂时性(a - f)和果树分析(g-k)比较SP旁观者和最简单的HD旁观者在CD4+CD45RA−T细胞膜上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的推选性布。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR隐含开展除去，模拟FlowSOM群体。(b) HD(黑点)和SP(黑斑)第三组以及酪氨酸SP 606(紫色)中会CD25+ cd127的基频摘要布。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+暂时性有界的罐本站布;(c) HLA-DRloGITR−(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3隐含强度着色，箭头突造出的簇被辨别为SP和HD队列错综复杂的各有不同。(j)罐本站布看出了在SP(黑斑)和HD(灰点)第三组中会，CITRUS潜意识Treg_3和Treg_4的相比较稀土元素(分之一)。(k)直方布看出每个簇的特异性(粉红色)和Treg上面相比较隐含与背景隐含(金色);上列，寄存器Treg_3;下面一行，寄存器Treg_4。背景与所有其他簇中会上面的隐含有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon一组符号秩检测

布3 与有益献血者远比，令人满意加速者潜意识treg的GITR降低。每个潜意识CD4+T细胞膜元簇(潜意识T细胞膜_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;CD49b +潜意识T细胞膜;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞膜;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)安全检查每个隐含上面的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的隐含热布(sp606不以外在内)。(c,d)潜意识Treg_4元簇中会所有HD(黄色)、所有SP(金色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR隐含串接，看出直方布(c)和摘要布(d)。Wilcoxon一组符号秩和检测，p< 0.07(紫色)所有酪氨酸以外，p< 0.05(金色)酪氨酸SP 606和最简单的HD不以外在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR隐含，从分级暂时性，从所有HD(黄色)、所有SP(金色)和SP 606(紫色)串接，看出直方布(e)和摘要布(f) *p< 0.05, Wilcoxon一组符号秩检测

布4 来自加速令人满意的CD4+ treg细胞膜控制效应CD4+T细胞膜的灵活性下降。SP第三组用金色的本站和白点指出，HD第三组用黑色的本站和白点指出，紫色的本站/白点指出酪氨酸sp606。用作CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜开展分选。CD4+CD25−(；也者)被上面为CFSE, Treg按注意到的分之一硫酸铜。用抗CD3 /28微珠活化细胞膜，培养3过后开展流式细胞膜奥义安全检查。(a-d)与CD4+；也者相比较应的treg培养(增生)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者培养。(a,b,f) CFSE抑制(a,e)和CFSE依赖性多于(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性多于。用作阴性对照(抑制的叛离细胞膜含treg)计算依赖性多于。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

布5 效应CD4+T细胞膜对加速令人满意的T细胞膜活化的依赖性来得敏感。SP第三组用金色的本站和白点指出，HD第三组用黑色的本站和白点指出，紫色的本站/白点指出酪氨酸sp606。用作CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜开展分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel上面，treg按注意到的分之一硫酸铜。用抗CD3 /28微珠活化细胞膜，培养3过后开展流式细胞膜奥义(CD25反染)和细胞膜因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606；也者共同培养。(a,b) CFSE抑制(a)和CFSE依赖性%-(b)。(c,d) CD25依赖性%-(c)和CD134依赖性%-(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在培养出来中会的隐含。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得造出的结论是，来自加速令人满意子的活化潜意识CD4+Treg在GITR隐含中会给予了扩展和丰富，突显了进一步数据分析Treg在1HG肝炎不确定性个体中会的表型的必要性。

原意造出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28